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液相色谱仪检定中常遇到的问题
点击次数:782 发布时间:2015-12-30
   由于HPLC系统中气泡的存在,会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰,严重时会造成分析灵敏度下降;气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定,使基线起伏。造成上述现象的主要原因有三条:一是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡;二是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净;三是在注入样品时不注意混入了空气。
  为了避免这类问题的出现,HPLC实际分析过程中必须重视对流动相进行脱气处理;在HPLC系统开始工作前,可以用注射器连接恒流泵的排空阀,抽入流动相,将流路中的空气驱赶干净;在注入样品前注意排出样品注射器中的空气。
  2.柱温
  在操作HPLC时,色谱柱是在室温环境下工作的。大多数的工作环境温度是不断变化的,温度的差别就会引起较复杂的问题。温度的影响在所有的色谱分析方式中都是存在的,HPLC方法中的洗脱方式受温度的影响。
  等度洗脱时温度会影响保留时间,当温度升高时所有的色谱峰都前移了,等度洗脱时一般温度每升高1℃,保留时间会缩短(1~3)%。温度变化对梯度洗脱和等度洗脱的影响趋势是一样的。温度变化对梯度洗脱的影响要小于对等度洗脱的影响。即便如此,若梯度洗脱时不控制温度的话,保留值一般也会有较大的变化。温度变化还可能引起选择性显著变化。
  正如柱子不能完全平衡将导致保留时间的重现性差一样,柱温不平衡也会导致不理想的后果,这个问题在峰宽上的影响尤其明显。当温度变化时除了选择性和保留时间的变化之外,峰宽也会发生变化。升高温度通常会使理论塔板数升高,峰宽变窄,由于峰面积不变,峰越窄就会越高,因此升高温度可以达到更小的检测限。
  柱子里的温度变化也会影响峰形。当流动相和柱子之间的温差增大时,由温度不平衡而导致的峰变形就会加剧。
  为了获得一致的结果我们必须要控制柱温,使用柱温箱是zui好的办法。如果没有柱温箱,zui有效的办法就是将色谱柱隔绝在一个温度波动zui小的地方。
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